重要提示
1. 与常规转染试剂不同,使用 QuickShuttle 可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染(立传立转),从而可节省18~24 小时的转染前细胞培养时间。
2. QuickShuttle极大简化了转染操作,转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血0清或更换培养基,整个转染操作可在一分钟内完成。
3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用 QuickShuttle 的转染实验可在细胞传代后 24小时内完成,从而比常规转染试剂节约 24~48 小时。
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan25;264(3):1508-15);转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小,脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。
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磷酸钙沉淀法
磷酸钙沉淀法师基于磷酸钙-DNA复合物将DNA倒入真核细胞的转染方法。磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与ba细胞表面的结合。当核酸以磷酸高-DNA复合物的形式出现时,可使DNA附在细胞表面,利于细胞的吞入摄取,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内。进入细胞的DNA仅有1%-5%可以进入细胞核中,lipo3000转染试剂,其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合,在细胞中进行稳定表达,基因转导的频率约为10-4,这项技术能用于任何DNA导入哺乳动物细胞进行暂时性的表达或长期的转化研究。
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