材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。
第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3d作腹腔注射加强免0疫。
腹0水的纯化
采集复水后，12 000 r/min 离心 15 min，质粒转染试剂，去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的PBS，并添加硫酸铵固体至 50% 饱和，静置 2 h，12 000 r/min离心15 min，弃 上 清，用 PBS 重 新 溶解 沉 淀，然 后 再次加入硫酸铵固体至 45% 饱和，静置两个小时左右，12 000 r/min 离心 15 min弃去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到较纯的抗0体，对 PBS 透析除去硫酸铵，透析时间为24h，透析过程中更换透析液两至三次。
试剂与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合试剂 50% PEG 购自美国 Sigma公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP)标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他试剂均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液qiang( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
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