哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。
将外源DNA导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类,即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注0射、电穿孔、脂质体介导的转染,lipo3000转染试剂,以及zui近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感0染的方式将外源DNA导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统zui为常用。
使用方法:
1. 转染前 18~24 小时接种细胞到 24 孔细胞板中,每孔 5~10×104细胞,1ml完全培养基。备注:如果筛选抗药性稳定细胞系,可以考虑简化的实验步骤,即在细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染,无需 18~24小时的等候时间。
2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注:质粒 DNA和转染试剂的zui适用量需要根据不同培养基来优化,但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。
3. 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。
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