使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。
2. 用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl）与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。
3. 通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。
（1）佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；
（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；
（3）尽量选择引流淋巴0结附近（如腋窝和腹0股0沟附近）的皮下或肌肉进行免0疫。
结 果
一、两种免0疫方式小鼠血0清效价比较
对两组试验动物在完成了基础免0疫后，尾静脉采集少量血液，分离血0清，进行间接ELISA测定抗0体效价，弗氏佐剂的作用，检测结果见图1。由图中数据可知，新的改良免0疫方法，在第二次免0疫后，抗0体效价即达到1：104。两组数据经生物学统计软件SPSS(Windows13．0版)进行t检验，统计结果差异极显著(P(0．001)。
二、两种免0疫方式小鼠融合率比较
在细胞融合后约7～10d可见孔内杂交瘤细胞生长，当细胞融合成片达孔底面积的35％～50％时，用ELISA检测特异性抗0体。两组免0疫小鼠细胞著。改良法耗费时间短，但获得的抗0体效价更高。
试剂与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合试剂 50% PEG 购自美国 Sigma公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP)标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他试剂均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液qiang( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
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