目前,由于灵敏度所限,多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增,不过也有不少人试图绕过这一问题,基因芯片检测,如Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法,基因芯片检查,引物特异性强,无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐;Lynx Therapeutics 公司引入的大规模并行固相法 (Massively parallel solid-phasecloning) ,可在一个样品中同时对数以万计的 DNA 片段进行,福建基因芯片,且无需单独处理和分离每个。
随着人类基因组(测序)计划( Human genome project)的基因芯片逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展,基因芯片问题,越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定,基因序列数据正在以的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此,建立新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行、快速的检测、分析就显得格外重要了。
2.大规模基因心片
大规模基因芯片通常涉及基因组规模与数量(一般大于10000个基因),分别采用接触式点样、非接触式点样或者半导体技术制备样品。接触式点样方法包括点样元件或点样元件中的液体和芯片基片间有直接接触的各种方法。非接触式芯片制备方法包括各种芯片制备中不需点样元件和芯片基片间直接接触的各种技术,其样头的是以可控的方式从喷嘴中喷出小体积的液滴。半导体制备技术指借鉴计算机芯片制造业中的微型化加工方法的基因芯片制备技术。基因芯片的工作流程如下:
(1) 经大规模PCR扩增获得独立cDNVA插入片段。
(2)用机械手将 PCR产物点在玻璃板上,变性、固定。
(3)分 别从不同或组织中分离mRNA.反转录生成cDNA.
(4)用 不同的荧光染料标记不同或组织的cDNA。
(5)将标记好的 cDNA与点好的芯片进行杂交。
(6)激光扫描芯片杂交结果, 计算机处理。
(7)分 析杂交数据。
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