信号通路研究工具细胞株

信号通路研究工具细胞株

  一些特定的信号通路基因，如NFAT，SMAD2，NF-KB等，由于其强大的生物学功能，在药物筛选和基础科研中，发挥了极大的作用。通过构建出其工具细胞株，我们可以快速，简洁的将其应用到特定靶点的药物筛选，特定信号通路的机制研究中，大大加速研究进程，并且获得高质量的数据结果。基于此，我们构建了一些通过报告基因反应信号通路活性的工具细胞株，提供给基础与研发工作者。

构建方法：

  信号通路研究工具细胞株现包括反映NAFT、CRE、NFKB等信号分子活性的细胞株，均采用慢病毒系统构建，经单克隆细胞筛选得到的稳定细胞系。稳定转入的基因包括一个由信号分子控制表达的报告基因及筛选稳定细胞株的嘌呤霉素抗性基因（图1）。所有细胞株均经过抗生素初筛、克隆筛选、细胞功能筛选，zui 终得到传代稳定，低本底表达及高反应性的细胞单克隆株。

图1、信号通路细胞株转入表达原件示意图

实例：

1、PMA/Ionomycin刺激NFAT-RE-EGFP细胞株

图2、NFAT-RE-EGFP稳转细胞株功能检测实验结果。细胞用PMA5ng/ml+Ionomycin 1uM刺激24小时，在荧光显微镜下观测EGFP荧光。

2、PMA/Ionomycin刺激NFAT-RE-Luci细胞株

图3、NFAT-RE-Luci稳转细胞株功能检测实验结果。细胞用PMA5ng/ml+Ionomycin1uM刺激6小时，收集细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶反应底物，用化学发光成像仪成像。

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