spCas9 SpRY体外酶切试剂盒

产品简介：
    本产品主要用于spCas9 SpRY tu bian ti体外酶切实验和靶点筛选等实验。
    SpCas9 tu bian tiSpRY识别的PAM序列为NRN（R为A/G）以及部分NYN（Y为C/T），与yesheng型spCas9的PAM序列NGG相比，极大的解除了PAM的限制，可供选择的靶点更多。

本试剂盒可以在体外qie ge PCR产物、质粒等双链DNA。
    试剂盒中提供了SpCas9 tu bian tiSpRY蛋白，反应缓冲液，以及对照sgRNA和底物DNA。使用该试剂盒可以快速开展体外酶切实验和筛选适合该 tu bianti的靶点。

活性定义：37℃，30分钟qie ge1ug 1kB DNA双链定义为1个活性单位。
储存条件：-20℃冻存

实验步骤：
1、qie ge反应：
1.1需准备：底物DNA，浓度大于100ng/ul；sgRNA，浓度大于200ng/ul。
！务必采用无RNA酶的耗材进行实验，注意防止RNA酶污染。

按照下表配制SpRY体外切割反应缓冲液，请按表中顺序加入：

 阳性对照反应：

1.2吹吸混合均匀。

反应程序：
37℃ 30min
85℃ 10min

2、产物检测：
快速检测：

1. 在反应体系中加入5μl Cleaner，混匀。55℃孵育5min。（本步骤及以后的步骤不必使用无RNA酶耗材操作）

2. 取5μl进行凝胶电泳检测（不必加入DNA LoadingBuffer）。

3、阳性对照电泳结果：
阳性对照DNA为760bp 双链DNA。含有单一靶点。切割产物为两条带分别是505bp左右和255bp左右。 

M：DL2000 DNA marker
1：SpRY蛋白不加gRNA切割30min
2：SpRY蛋白加gRNA1切割30min
3：SpRY蛋白加gRNA2切割30min
4：SpRY蛋白加gRNA3切割30min

产品保存和使用注意事项：

1. SpRY蛋白使用过程中尽量保持低温。

2. 阳性对照sgRNA需用无RNA酶枪头取用，以免RNase污染导致降解。

3. 若切割效果不理想，可提高sgRNA的含量。

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